10086 v.A
細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

主要用途
磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B）細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)使用蛋白結(jié)合性紅色染料，即比色法定量測(cè)定細(xì)胞內(nèi)總蛋白質(zhì)合成率，以評(píng)價(jià)活體細(xì)胞繁殖的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種藥物、化學(xué)、環(huán)境因子和營(yíng)養(yǎng)因子處理的貼壁生長(zhǎng)中的動(dòng)物或人體細(xì)胞。替代傳統(tǒng)的同位素[3H]-thymidine檢測(cè)的佳選擇。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，簡(jiǎn)捷敏感，性能穩(wěn)定，顯色清晰。
技術(shù)背景
作為蛋白質(zhì)染色劑之一的磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B），又稱酸性紅52（Acid Red 52），是一種陰離子染料，與蛋白質(zhì)靜電（electrostate）結(jié)合，在540nm波長(zhǎng)下產(chǎn)生吸收峰：吸光值與細(xì)胞量成線性正相關(guān)。
產(chǎn)品內(nèi)容
固著液（Reagent A） 毫升
清理液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 毫升
酸性液（Reagent D） 毫升
溶解液（Reagent E） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
保存方式
保存在室溫下，染色液（Reagent C）避免光照，有效保證6月
用戶自備
*細(xì)胞培養(yǎng)液：用于懸浮細(xì)胞的混勻
15毫升錐形離心管：用于懸浮細(xì)胞操作的容器
比色皿：用于細(xì)胞染色比色的容器
臺(tái)式離心機(jī)：用于沉淀細(xì)胞
平式搖蕩儀：用于混勻染料
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于定量檢測(cè)染色后的細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 貼壁細(xì)胞檢測(cè)
1． 準(zhǔn)備96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測(cè)細(xì)胞 
2． 到規(guī)定的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，從細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板
3． 小心加入50微升預(yù)冷的固著液（Reagent A）到含有200微升細(xì)胞培養(yǎng)液的96孔板中每一個(gè)孔里（注意：每孔中的培養(yǎng)液需200微升）
4． 放進(jìn)4℃冰箱里，孵育1小時(shí)
5． 小心抽去含有固著液（Reagent A）的細(xì)胞培養(yǎng)液
6． 小心加入xx微升清理液（Reagent B）
7． 小心抽去清理液
8． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟6至7二次
9． 小心加入xx微升染色液（Reagent C）
10．室溫下孵育30分鐘，避免光照
11．小心抽去染色液
12．小心加入xx微升酸性液（Reagent D）
13．快速抽去酸性液（注意：參見注意事項(xiàng)8）
14．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟12至13一次（注意：確保培養(yǎng)孔中無(wú)任何液體殘留；注意事項(xiàng)6）
15．加入xx微升溶解液（Reagent E）
16．置放在平式搖蕩儀上，室溫下孵育5分鐘，速度為50RPM，避免光照
17．即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀里測(cè)讀：波長(zhǎng)540nm，參考波長(zhǎng)690nm
18．實(shí)際吸光讀數(shù)＝OD540－OD600
19．繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為實(shí)際吸光讀數(shù)（A）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)或時(shí)間點(diǎn)或藥物濃度
二、 懸浮細(xì)胞檢測(cè)
1． 準(zhǔn)備待測(cè)的懸浮細(xì)胞
2． 到規(guī)定的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，轉(zhuǎn)移到15毫升錐形離心管
3． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
4． 小心抽去上清液
5． 加入200微升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
6． 小心加入50微升預(yù)冷的固著液（Reagent A），混勻
7． 放進(jìn)4℃冰箱里，孵育1小時(shí)
8． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
9． 小心抽去含有固著液（Reagent A）的細(xì)胞培養(yǎng)液
10．小心加入xx微升清理液（Reagent B），混勻
11．放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
12．小心抽去清理液
13．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟10至12二次
14．小心加入xx微升染色液（Reagent C），混勻
15．室溫下孵育30分鐘，避免光照
16．放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
17．小心抽去染色液
18．小心加入xx微升酸性液（Reagent D）
19．放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
20．小心抽去酸性液
21．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟18至20一次（注意：確保無(wú)任何液體殘留） 2
22．加入xx微升溶解液（Reagent E），混勻
23．平放在平式搖蕩儀上，室溫下孵育5分鐘，速度為50RPM，避免光照
24．即刻轉(zhuǎn)移到比色皿
25．放進(jìn)分光光度儀儀里測(cè)讀：波長(zhǎng)540nm，參考波長(zhǎng)690nm
26．實(shí)際吸光讀數(shù)＝OD540－OD600
27．繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為實(shí)際吸光讀數(shù)（A）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)或時(shí)間點(diǎn)或藥物濃度
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為100次操作
2． 操作時(shí)須戴手套
3． 整個(gè)操作須無(wú)菌操作
4． 如果染色液（Reagent C）出現(xiàn)沉淀，建議過(guò)濾后，再使用
5． 建議檢測(cè)96孔板里的細(xì)胞量小于106
6． 建議使用有培養(yǎng)液但無(wú)細(xì)胞作為背景空對(duì)照：樣品讀數(shù)－背景空對(duì)照讀數(shù)
7． 每孔中的培養(yǎng)液需200微升，注意周邊培養(yǎng)孔的液體蒸發(fā)
8． 孵育時(shí)，須避光
9． 使用酸性液（Reagent D），需快速進(jìn)行，以免染料漏出胞外
10．細(xì)胞濃度過(guò)高，可以使用波長(zhǎng)490至530nm
11．如果用戶沒有匹配的波長(zhǎng)，可以使用波長(zhǎng)490nm至560nm之間的任一波長(zhǎng)替代
12．本公司提供系列細(xì)胞繁殖檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰