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動(dòng)物細(xì)胞/組織線粒體粗提分離試劑盒
點(diǎn)擊次數(shù):1085 更新時(shí)間:2016-10-31
 

主要用途:
  動(dòng)物細(xì)胞/組織線粒體粗提分離試劑是一種旨在從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體細(xì)胞器的
而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和培
養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、能量代謝、蛋白組學(xué)和病理
生理學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產(chǎn)量和純度堪稱同類產(chǎn)品
佳。

保存方式:
  保存凈化液在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6 月

用戶自備:
HANK 平衡鹽緩沖溶液或PBS 緩沖溶液:用于清理細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液:用于細(xì)胞脫離
*細(xì)胞培養(yǎng)液:用于細(xì)胞處理所需的培養(yǎng)基
15 毫升錐形離心管:用于線粒體初步制備物的存放
50 毫升錐形離心管:用于細(xì)胞或組織收集后離心或清洗
1.5 毫升離心管:用于保存線粒體
4℃臺(tái)式離心機(jī):用于沉淀細(xì)胞
4℃超速離心機(jī):用于分離細(xì)胞器成分
DOUNCE 勻漿器:用于裂解細(xì)胞

注意事項(xiàng):

1. 本產(chǎn)品為10 次(1 克動(dòng)物組織或5 X 107 細(xì)胞)或50 次(200 毫克動(dòng)物組織或1 X 107 細(xì)胞)操作
2. 實(shí)際操作的動(dòng)物組織重量或細(xì)胞量與試劑使用量按比例調(diào)整:例如200 毫克動(dòng)物組織:試劑用量是標(biāo)
準(zhǔn)用量的五分之一
3. 所有操作均須嚴(yán)格在4℃或以下?tīng)顟B(tài)進(jìn)行
4. 操作時(shí),須戴手套
5. 操作時(shí),須無(wú)菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(Reagent B)和保存液(Reagent E)
6. 建議使用足夠的樣品量
7. 建議嚴(yán)格控制操作時(shí)間
8. 通常勻化次數(shù)為20 至40 下(或細(xì)胞顆粒群/組織塊狀消失為止)達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài),但
不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過(guò)顯微鏡觀察3 微升勻漿物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)
胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加勻化次數(shù)
9. 通常孵育5 分鐘(不宜超過(guò)5 分鐘)達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存
在差異。用戶可以通過(guò)顯微鏡觀察3 微升裂解物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50
%可以增加孵育時(shí)間和渦旋震蕩次數(shù)
10.對(duì)于難以裂解的細(xì)胞,例如HeLa 細(xì)胞,采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術(shù)處理
11.通常1 克動(dòng)物組織或5 X 107 細(xì)胞的線粒體含量為50 微克以上線粒體蛋白
12.如果需要計(jì)量線粒體,稀釋后數(shù)分鐘內(nèi)完成,否則線粒體將分解
13.本產(chǎn)品所獲得的線粒體純度和產(chǎn)量為理想。通過(guò)調(diào)整10000g離心速度到3000至8000g,可以提高粗提
的線粒體純化程度,但線粒體產(chǎn)量相應(yīng)減少
14.如果需要獲得99%以上純度的線粒體,使用動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒
15.線粒體正?;钚詼y(cè)定方法是: CITRATE SYNTHASE 活性、氧化磷酸化、細(xì)胞色素吸收峰譜等
16.線粒體內(nèi)外膜完整測(cè)定方法是:CYTOCHROME C OXIDASE 活性和熒光JC 染色
17.本公司提供線粒體套餐:ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、線粒體溶解等
18.本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品